Время анализа значительно сокращается примерно с часа до нескольких минут благодаря недавно опубликованному методу RTF-EXPAR, который использует подход без обратной транскриптазы (RTF) для преобразования РНК в ДНК за которым следует EXPAR (реакция экспоненциальной амплификации) для амплификации при одной температуре.
Контролируя скорость Covid-19. Распространение требует точной и быстрой стратегии тестирования на вирусы. ОТ-ПЦР (полимеразная цепная реакция с обратной транскриптазой), наиболее точным методом тестирования, используемым в настоящее время, является двухэтапный тест, который занимает около 60 минут на образец.
Исследователи из Университета Бирмингема сообщили о новом методе обнаружения SARS-CoV-2. Это может обеспечить гораздо более быстрое тестирование и достаточно чувствительно.
Обнаружение вирусной РНК ОТ-ПЦР (полимеразная цепная реакция с обратной транскриптазой) включает преобразование вирусной РНК в комплементарную ДНК (кДНК) с последующей амплификацией кДНК с помощью количественной ПЦР (кПЦР). Затем кДНК детектируют с помощью флуоресцентного красителя. На это уходит до часа.
Время анализа значительно сокращается примерно с часа до нескольких минут благодаря новому методу RTF-EXPAR, который использует подход без обратной транскриптазы (RTF) для преобразования РНК в ДНК за которым следует EXPAR (реакция экспоненциальной амплификации) для амплификации при одной температуре. Амплификация, происходящая при одной температуре, является ключом к скорости, поскольку позволяет избежать длительных этапов нагревания и охлаждения при RT-PCR. Кроме того, амплифицируемый участок ДНК меньше по сравнению с RT-PCR. Таким образом, EXPAR генерирует до 108 нитей ДНК-продукта за несколько минут. За образованием дуплекса следят, как и в методе RT-PCR, с использованием флуоресцентного красителя SYBR Green.
Интересно, что новый метод может быть модифицирован для обнаружения ряда других инфекционных заболеваний, вызываемых РНК-вирусами, например Эбола, RSV и т. Д.
Источник (ы):
Картер и др. (2020). Выявление РНК SARS-CoV-5 менее чем за 2 минут с использованием реакции экспоненциальной амплификации без обратной транскриптазы, RTF-EXPAR. Препринт. Опубликовано в medRxiv. Опубликовано 04 января 2021 г. DOI: https://doi.org/10.1101/2020.12.31.20248236
