Время анализа значительно сокращается с примерно часа до нескольких минут благодаря недавно опубликованному методу RTF-EXPAR, который использует подход без обратной транскриптазы (RTF) для преобразования РНК в ДНК с последующей реакцией EXPAR (экспоненциальная амплификация) для амплификации при одной температуре. .
Контроль скорости распространения COVID-19 требует точной и быстрой стратегии тестирования на вирусы. ОТ-ПЦР (полимеразная цепная реакция с обратной транскриптазой), наиболее точный метод тестирования, используемый в настоящее время, - это двухэтапный тест, который занимает около 60 минут на образец.
Исследователи из Университета Бирмингема сообщили о новом методе обнаружения SARS-CoV-2. Это может обеспечить гораздо более быстрое тестирование и достаточно чувствительно.
Обнаружение вирусной РНК ОТ-ПЦР (полимеразная цепная реакция с обратной транскриптазой) включает преобразование вирусной РНК в комплементарную ДНК (кДНК) с последующей амплификацией кДНК с помощью количественной ПЦР (кПЦР). Затем кДНК детектируют с помощью флуоресцентного красителя. На это уходит до часа.
Время анализа значительно сокращается с примерно часа до нескольких минут благодаря недавно опубликованному методу RTF-EXPAR, который использует подход без обратной транскриптазы (RTF) для преобразования РНК в ДНК, а затем EXPAR (реакция экспоненциальной амплификации) для амплификации при одной температуре. . Амплификация, происходящая при одной температуре, является ключом к скорости, поскольку позволяет избежать длительных стадий нагревания и охлаждения при ОТ-ПЦР. Кроме того, амплифицируемый участок ДНК меньше по сравнению с ОТ-ПЦР. Следовательно, EXPAR генерирует до 108 нитей продукта ДНК за несколько минут. За образованием дуплекса следят, как в методе ОТ-ПЦР, с использованием флуоресцентного красителя SYBR Green.
Интересно, что новый метод может быть модифицирован для обнаружения ряда других инфекционных заболеваний, вызываемых РНК-вирусами, например Эбола, RSV и т. Д.
Источник (ы):
Картер и др. (2020). Выявление РНК SARS-CoV-5 менее чем за 2 минут с использованием реакции экспоненциальной амплификации без обратной транскриптазы, RTF-EXPAR. Препринт. Опубликовано в medRxiv. Опубликовано 04 января 2021 г. DOI: https://doi.org/10.1101/2020.12.31.20248236
